技術文章
PCR實驗室平面布局
PCR實驗室原則上分為四個單獨的工作區域:試劑貯存和準備區、標本制備區、擴增反應混合物配置和擴增區、擴增產物分析區,為了避免交叉污染,進入各個工作區域必須嚴格遵循單一方向進行,即只能從試劑貯存和準備區→標本制備區→擴增反應混合物配制和擴增區→擴增產物分析區,各實驗區之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。
實驗室空調通風系統設計及壓力控制
PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區域間交叉污染的可能性,適合用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風的比例以保證實驗區的壓力要求。
實際貯存和準備區
PCR實驗室主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝盒主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送到這個區,不得經過其他區域。試劑原料必須貯存在本區內,并再本區內制備成所需的貯存試劑。該區對與氣流壓力的控制沒有嚴格的要求。
標本制備區
該區域主要進行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入值擴增反應管和測定DNA的合成。壓力梯度要求為:相對領巾區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染,另外由于在加樣操作中可能會發生氣溶膠所致的污染,所以應避免在本區內不必要的走動。
擴增反應混合物配制和擴增區
該區域主要進行的操作為DNA擴增,此外,已制備的DNA模板(來自樣本制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可以在本區內進行。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區內的布必要走動,個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。
擴增產物分析區
該區域主要進行的操作為擴增片段的測定,本區是zui主要的擴增產物污染來源,因此對本區的壓力梯度要求為相對鄰近區域為負壓,以避免擴增產物從本區擴散至其他區域。